三聚氰胺检测液相色谱仪固相萃取法

       三聚氰胺，俗称密胺、蛋白精，是一种重要的化工原料，没有任何营养价值，是国家禁止在食品或饲料中使用的添加物，但因其含氮量高达66%，被一些造假者利用，添加在饲料或食品中，造成蛋白质含量高的假象，以获得更*，如果蛋鸡长期食用含有三聚氰胺的饲料，会导致鸡蛋中残留三聚氰胺。研究表明，三聚氰胺会造成生殖、泌尿系统的损害，膀胱以及肾部的结石，并可进一步诱发膀胱癌。

三聚氰胺检测液相色谱仪固相萃取法主要仪器设备

液相色谱仪，紫外检测器，SPE固相萃取装置，涡旋振荡仪，氮气吹干仪，真空泵，高速离心机，电子天平。

试剂材料

市售巧克力，三聚氰胺标品，乙腈（色谱纯），甲酸、氨水、甲醇、庚烷磺酸钠、柠檬酸（均为分析纯）。

色谱柱：ATEO-C18（5 μm，120 Å，4.6×250 mm，

SPE柱：AE.SPE-MCX（60 mg/3 mL）

三聚氰胺检测液相色谱仪固相萃取法样品提取

      取5 g粉碎巧克力样品，加入20 mL 50%乙腈水溶液混合，涡旋振荡10 min，6000 r/min 离心5 min，取上清液待净化。

SPE柱净化

（1）活化：分别用3 mL甲醇、3 mL 4%甲酸水活化固相萃取柱。

（2）上样：将提取液加入小柱中，以≦1 mL/min的流速过柱，弃去滤液。

（3）淋洗：依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，淋洗液弃去。

（4）洗脱：用3 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液。

（5）重新溶解：50℃下氮吹吹干后，用20% 甲醇水溶液溶解并定容至1 mL，0.45μm滤膜过滤，供HPLC检测。

液相色谱条件

色谱柱：ATEO-C18（250 * 4.6 mm，5 μm）

检测器：UV2996型紫外/可见光检测器

检测波长：UV 240 nm                

流动相：缓冲溶液*/乙腈 = 92/8（v/v）          

流速：1.0 mL/min

柱温：30 ℃                 

进样量：20 μL

缓冲溶液：分别称取2.02 g庚烷磺酸钠、2.10 g柠檬酸钠，用水定容至1 L。

三聚氰胺检测液相色谱仪固相萃取法分析结果

      采用，添加回收率达92.27%，表明使用AE.SPE-MCX固相萃取柱及ATEO-C18柱，可快速可靠地检测巧克力中的三聚氰胺。